Методы определения антагонистической активности молочнокислых бактерий - davaiknam.ru o_O
Главная
Поиск по ключевым словам:
страница 1
Похожие работы
Название работы Кол-во страниц Размер
Как из соломы получить хороший корм? 1 21.54kb.
Урок по теме: «Бактерии. Строение и жизнедеятельность бактерий» учитель... 1 75.38kb.
Метод определения тепловыделения 1 123.18kb.
Чистых культур бактерий 1 50.98kb.
Активные методы обучения Проблема активности личности в обучении 1 307.69kb.
Светящихся бактерий 2 1 141.34kb.
Урок биологии в 6 классе 1 45.19kb.
Государственный стандарт союза сср 1 75.74kb.
Государственный стандарт союза сср 1 101.9kb.
Хлысты древесные ост 13-75-88 Методы определения объема 1 119.8kb.
Организация 1 12.27kb.
Система социальных ролей ученического класса. Изгои 1 75.17kb.
Направления изучения представлений о справедливости 1 202.17kb.

Методы определения антагонистической активности молочнокислых бактерий - страница №1/1

УДК 637.1
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ

Иркитова А.Н., Каган Я.Р.

ГНУ Сибирский научно-исследовательский институт сыроделия Россельхозакадемии, Барнаул



Способность молочнокислых бактерий образовывать антибиотические вещества и за счет этого оказывать бактерицидное и бактериостатическое действие на вредную микрофлору широко используется в пищевой промышленности, медицине, ветеринарии и в сельском хозяйстве. Вот лишь 3 примера, касающиеся пищевой промышленности. В сыроделии применяют штаммы молочнокислых бактерий – антагонисты к кишечной палочке и маслянокислым бактериям, вызывающим, соответственно, раннее и позднее вспучивание сыров [1]. При изготовлении ацидофильного молока, кумыса, курунги и других диетических и лечебных кисломолочных продуктов в состав заквасок рекомендуется вводить молочнокислые бактерии, обладающие антагонистической активностью к возбудителям острых желудочно-кишечных инфекций [2]. Молочнокислые бактерии используют в хлебопечении в качестве антагонистов споровой палочки Bacillus mesentericus - возбудителя так называемой картофельной болезни хлеба [3].

Известно, что антагонистическая активность бактерий осуществляется с помощью разных (зачастую очень тонких) молекулярных механизмов, а ее проявление зависит от ряда факторов, среди которых прежде всего следует назвать разнообразие взаимодействий антагониста и его жертвы в конкретных условиях внешней среды [4]. Неудивительно поэтому, что исследователи, определяя антагонистическую активность микроорганизмов, используют разные методы, различающиеся по сложности выполнения, производительности, сравнимости и точности получаемых результатов.

Все разработанные к настоящему времени методы определения антагонистической активности микроорганизмов традиционно принято делить на две группы: методы in vitro (в искусственных условиях) и методы in vivo (в живом организме). Однако, поскольку, строго говоря, термин in vivo касается только тех случаев, когда внешней средой взаимодействия микроорганизмов (антагониста и его потенциальной жертвы) является организм хозяина (в роли которого выступает человек или подопытное животное), а примеры практического использования явления микробного антагонизма значительно шире, на наш взгляд, более справедливо делить эти методы на методы in vitro и методы in situ. Термин «in situ» применительно к биологии означает, что явление изучается там, где оно естественно и происходит (например, непосредственно в сыре или в ферментере), то есть, без перемещения его в искусственную среду. Таким образом, методы in vivo можно рассматривать как частный случай методов in situ (рис. 1).

Методы определения антагонистической активности

молочнокислых бактерий



in vitro




in situ



in vivo

↓ ↓ ↓

Диффузионные методы

(перпендику-лярных штрихов; лунок; блоков; капель; напыления; агаровых слоев)




Тестирование в жидких питательных средах

(совместное культивирование антагониста и тест-культуры; культивирование тест-культуры в присутствии супернатанта штамма-антагониста)




Тестирование в естественной среде взаимодействия антагониста и предполагаемой жертвы




Приём живой культуры-антагониста человеком или подопытным животным с последующим анализом изменений в кишечной флоре



Рис.1. Методы определения антагонистической активности молочнокислых бактерий
На первых этапах исследования используют в основном методы in vitro. Они позволяют отсеять не представляющие интереса не активные или малоактивные штаммы. Дальнейшее исследование с помощью методов in situ (in vivo) проводят, как правило, с единичными наиболее перспективными штаммами. Зачастую на этом этапе используют уже не чистые культуры молочнокислых бактерий-антагонистов, а препараты на их основе.

Методы in vitro. Эти методы позволяют довольно просто и быстро проверить большой массив штаммов молочнокислых бактерий и/или тест-культур нежелательных микробов (санитарно-показательных, патогенных или технически-вредных). Различают диффузионные методы и тестирование в жидких питательных средах.

Диффузионные методы (метод перпендикулярных штрихов, метод блоков или лунок, метод капель и т.п.) основаны на диффузии антибиотических веществ, образуемых испытуемыми штаммами лактобактерий, в толщу агаровой среды, содержащей тест-культуру и подавляющей рост последней.

Согласно широко используемому в микробиологии методу перпендикулярных штрихов [5, 6, 7, 8], на поверхности агаровой среды в чашке Петри высевают штрихом экспоненциальную культуру исследуемого штамма лактобактерий и инкубируют при оптимальной для него температуре (30 и 37 оС соответственно для мезофильных и термофильных форм) в течение определенного времени (например, 24 или 48 ч) для образования и диффузии в агар ингибиторных соединений. Затем перпендикулярно от края чашки к штриху выросшей культуры лактобактерий подсевают штрихом экспоненциальную культуру тест-штамма (например, E.coli), слегка касаясь штриха лактобактерии. Чашку вновь инкубируют, но теперь при условиях (температура и продолжительность), благоприятных для роста тест-культуры. О наличии и степени антагонистической активности у испытуемой лактобактерии судят по величине зоны ингибирования тест-штамма на границе со штрихом роста лактобактерии (рис.2). На одной чашке к лактобактерии можно подсеять несколько тест-культур и, таким образом, выявить спектр антагонистического действия данной лактобактерии. Используемая агаровая среда должна обеспечивать хороший рост как испытуемого штамма лактобактерий, так и тест-штамма (или тест-штаммов). Чашки можно инкубировать в аэробных условиях, либо (при необходимости) в анаэростате. Для исключения влияния молочной кислоты и рН на результаты тестирования, в агаровую среду вносят подходящие буферные соли. Аналогичным образом, влияние перекиси водорода снимают добавлением в среду каталазы. Так как размер зон ингибирования тест-культуры в значительной степени зависит от толщины слоя питательного агара, чашки Петри перед розливом среды располагают на строго горизонтальной поверхности и в каждую чашку наливают одинаковое количество расплавленной среды. Для объективной оценки антагонистического действия лактобактерий, выявляемого этим методом, необходимо учитывать, что он дает преимущество штаммам, продуцируемым ингибиторные соединения небольшой молекулярной массы, которые быстрее диффундируют в толще агарового слоя и, следовательно, дают более обширные зоны ингибирования роста тест-культуры. Этот метод имеет, однако, существенный недостаток: продуцент антибиотического вещества и тест-организм выращивают на одной среде, хотя известно, что не всегда одна и та же среда одинаково благоприятна как для продуцента и образования им антибиотика, так и для роста тест-организма.



При использовании метода блоков [6, 9] испытуемую культуру лактобактерий высевают глубинным способом в питательный агар в чашке Петри и инкубируют в оптимальных, строго соблюдаемых, условиях для образования и накопления в агаре ингибиторных соединений. Затем стерильным пробочным сверлом вырезают агаровый диск (блок) с выросшей культурой лактобактерии и устанавливают его в другой чашке Петри на поверхности агаровой среды, только что засеянной культурой тест-штамма. Чашку выдерживают в течение определенного времени в холодильнике (во избежание преждевременного роста тест-штамма) для диффузии ингибиторных соединений из блока в толщу агара с тест-штаммом, а затем инкубируют в определенных условиях, оптимальных для тест-штамма. О степени антагонистической активности испытуемой лактобактерии судят по величине зоны ингибирования роста тест-штамма вокруг агарового блока (рис.3). Для тест-штамма в чашке Петри целесообразно формировать двухслойный агар: на дно чашки наливают 15 см3 незасеянной расплавленной плотной (2 % агара) питательной среды (нижний слой), после застывания которой на ее поверхность наслаивают 5 см3 полужидкой (0,35 % агара) среды, содержащей тест-культуру (верхний слой); это обеспечивает более равномерное распределение тест-штамма по всей поверхности чашки. В отличие от метода перпендикулярных штрихов, метод блоков дает возможность сравнить на одной чашке несколько (4-8) штаммов лактобактерий к данной тест-культуре. Преимуществом метода блоков является то, что он позволяет использовать разные по составу питательные среды: одну (блок) - для испытуемой лактобактерии, другую - для использования данного тест-штамма. Кроме того, он удобен для изучения влияния состава питательной среды на продукцию ингибиторных соединений исследуемым штаммом лактобактерий.

Метод лунок [6, 10] в принципе схож с вышеописанным методом агаровых блоков, но в этом случае взамен установки блока в слое агара, содержащего тест-штамм, пробочным сверлом вырезается лунка диаметром 5-7 мм и в нее помещают определенное количество (например, 0,2 см3) жидкой или полужидкой среды с выросшей культурой исследуемого штамма лактобактерий. Чашку выдерживают в холодильнике для диффузии ингибиторных веществ из лунки в толщу агара, далее - в термостате для роста тест-штамма, после чего измеряют зону ингибирования тест-штамма вокруг лунки. Методом лунок можно определять антагонистическую активность чистых и смешанных молочных культур лактобактерий, например, сравнить по этому показателю различные коммерческие кисломолочные продукты. К недостаткам метода можно отнести опасность подтекания жидкости с культурой лактобактерий из лунки в щель между агаром и дном чашки, что ведет к искажению результата. Избежать подтекания можно путем формирования лунки, не доходящей до дна чашки, используя при заливке чашки агаровой средой соответствующие шаблоны (как это делается для электрофореза в агарозном геле). Альтернативный вариант - использование двухслойного агара (нижний слой - плотный, верхний - полужидкий агар, каждый слой по 10 см3/чашку), при этом лунка вырезается только в верхнем слое. Метод лунок рекомендуют использовать для выбраковки штаммов-антагонистов при составлении заквасочных комбинаций лактобактерий (тест на «биологическую совместимость»).

При использовании метода агаровых слоев [11] исследователи применили модификации, позволяющие дифференцировать продукцию бактериоцинов (высокая молекулярная масса) и микроцинов (низкая молекулярная масса). В первом случае на поверхность плотной питательной среды МРC-4 наносили бляшками (4-8) лактобациллы и культивировали при температуре 37ºС в течении 48 часов. Далее на крышку чашки наносили 5 мл хлороформа, оставляя чашки перевернутыми в течении 5 минут. Убитые в парах хлороформа бактерии помещали в термостат на 30 минут для испарения хлороформа. Затем на чашки наслаивали 0,7% полужидкого мясо-пептонного агара с равномерно распределенной в нем тест-культурой и вновь культивировали при 37ºС в течении ночи. Положительный результат учитывали по появлению вокруг бляшки зоны отсутствия роста.

Во втором случае с целью индикации микроцинов (бактериоцинов с низкой молекулярной массой) на поверхность плотной среды МРС-4 с нанесенными, выросшими и обработанными в парах хлороформа бляшками, накладывали стерильный целлофан. Сверху на целлофан наносили 3 мл 0,7% агара, содержащего 107 клеток тест-культуры, взятой в экспоненциальной фазе роста. Культуры инкубировали 18-20 часов при 37ºС. Вокруг колоний, продуцирующих микроцины, появлялись зоны задержки роста индикаторных штаммов. Несомненным реимуществом данного метода является возможность дифференцировать продукцию бактериоцинов, а недостатком – высокая трудоёмкость процесса.

Некоторые исследователи, изучая антагонистические свойства лактобактерий, применяли метод капель [12], согласно которому на поверхность подсушенной агаровой среды наносят капли культур лактобактерий и после инкубации чашек (для роста лактобактерий и продуцирования ими ингибиторных веществ) поверх агара наливают слой полужидкой агаровой среды, содержащей тест-штамм, и вновь инкубируют (до появления зон ингибирования роста тест-штамма).

Глушанова и другие модифицировали метод капель следующим образом: суточную культуру пробиотика, выращенную на жидкой питательной среде, наносят на поверхность плотной среды в чашках Петри бактериологической петлей диаметром 2-3 мм и оставляют при комнатной температуре до полного впитывания капли. После этого, отступив 1-2 мм от края первого пятна, наносят каплю суточной испытуемой культуры, выращенной на той же питательной среде. Растекаясь, вторая капля заходит на пятно культуры пробиотика примерно на половину диаметра. В наложенной части культуры развиваются при взаимном присутствии (совместное культивирование), конкурируя друг с другом. Свободные части пятен каждой культуры служат контролем жизнеспособности каждой из культур и всхожести питательной среды. После подсыхания капли второй культуры чашки с посевами инкубируют крышкой вниз при оптимальной температуре. Чтобы исключить возможность влияния последовательности наслоения капель культур пробиотических лактобацилл и тестируемых микроорганизмов на характер в зоне совместного культивирования, каждый опыт ставят в двух вариантах, меняя очередность посева культур. Предварительный учет результатов проводят через 18-20 часов инкубации, окончательный учет – через 48 часов. Результат опыта учитывают визуально по наличию признаков подавления одной культуры другой. Антагонистическую активность бактерий оценивают по числу подавляемых ими штаммов тестируемых микроорганизмов (в %) [12].

Глушанова использовала вышеописанный метод капель и для проверки биосовместимости кишечных штаммов лактобацилл: штаммы считали биосовместимыми, если их рост в частично совмещенных каплях не отличался от их роста в контроле (вариант, в котором обе капли содержат культуру одного и того же штамма). В тех же случаях, когда в частично совмещенных каплях наблюдается, по сравнению с контролем, задержка или отсутствие роста одного из штаммов, отношения между штаммами рассматривали как антагонистические и штаммы относили к бионесовместимым [13].

Метод Глушановой представляет несомненный интерес, поскольку в этом случае, в отличие от диффузионных методов (методов «отсроченного антагонизма»), происходит непосредственное взаимодействие исследуемых партнеров. Следует, однако, заметить, что при апробировании данного метода мы, точно следуя указаниям его автора, тем не менее, не получили удовлетворительных результатов: все 8 имеющихся в нашей коллекции производственных штаммов ацидофильной палочки, известных как заведомые антагонисты патогенных и условно-патогенных бактерий, в том числе бактерий группы кишечных палочек, при использовании метода Глушановой не оказали сколько-нибудь заметного угнетающего действия на рост тест-штаммов кишечной палочки на «чистом» или совмещенном участках пятен и дали значительные зоны ингибирования роста этих тест-штаммов при их параллельном тестировании «классическими» диффузионными методами (метод перпендикулярных штрихов и метод блоков).

Lewus C., Montville T. [14] сравнили эффективность трех методов (модифицированный метод перпендикулярных штрихов, метод лунок и метод капель) для выявления лактобактерий - продуцентов бактериоцинов. Исследователи пришли к выводу, что лучшие результаты дает метод капель, который позволяет более полно выявлять бактериоциногенные штаммы и исключает появление зон ингибирования, обусловленных действием молочной кислоты или перекиси водорода.

Оригинальный вариант диффузионного чашечного метода предложен Е.Заборских (1976) для выявления антагонистически активных клонов, образующихся после мутагенной обработки лактобактерий [15]. По этому методу серийные разведения мутагенизированных клеточных суспензий высевают на поверхность агаровой среды и после инкубации при условиях, оптимальных для данного штамма лактобактерий, отбирают чашки, в которых количество выросших изолированных колоний не превышает 30. Методом реплик Ледерберга [16] колонии с этих чашек переносят в чашки с плотной агаровой средой (количество чашек-реплик соответствует числу используемых тест-штаммов). Чашки-реплики инкубируют при оптимальных условиях для образования и диффузии в агар ингибиторных веществ, а затем опрыскивают взвесями клеток соответствующих тест-штаммов. После дополнительной инкубации чашек-реплик при условиях, оптимальных для тест-штаммов, с исходных чашек для дальнейших исследований отбирают клоны, давшие на чашках-репликах наибольшие зоны ингибирования роста тест-штаммов. Этот метод по производительности многократно превосходит вышеописанные диффузионные методы, однако его использование грозит опасностью загрязнения лаборатории взвесями тест-культур, что весьма ограничивает возможность применения данного экспресс-метода.

В основе второй группы методов in vitro определения антагонистической активности молочнокислых бактерий лежит принцип тестирования в жидких питательных средах. В общем виде эти методы заключаются в том, что тест-культуру выращивают в оптимальной для нее жидкой питательной среде, к которой добавлено то или иное количество бесклеточной культуральной жидкости исследуемого штамма-антагониста или тест-штамм совместно выращивают со штаммом-антагонистом. О наличии и степени антагонистического действия судят по угнетению роста [16] или метаболитической активности [17] тест-штамма в сравнении с контролем (параллельная культура тест-штамма без добавления бесклеточной культуральной жидкости исследуемой лактобактерии). О росте тест-штамма судят по численности клеток (определяют турбидиметрическим методом или высевом разведений на плотную среду с последующим подсчетом КОЕ), а о его метаболитической активности - по какому-либо характерному для тест-штамма наглядному признаку, например, по скорости восстановления трифенилтетразолия [15].

Наибольший интерес, с нашей точки зрения, представляет метод совместного культивирования молочнокислых бактерий с тест-организмами, поскольку он позволяет в естественной для молочнокислых бактерий среде (например, в молоке) определить их антагонистические свойства.

Из инновационных методов определения антагонистической активности бактерий в жидкой среде упомянем экспресс-тест, основанный на ингибировании биолюминисценции у специально сконструированного индикаторного штамма Escherichia coli lum+С-50 [18]. Авторы с помощью этого метода сравнивали антагонистическую активность зарубежных препаратов и нового отечественного комплексного пробиотика. Анализ заключался в совместном 24-часовом культивировании испытуемого пробиотика с индикаторным штаммом при температуре 20оС с периодическим измерением интенсивности люминисценции с помощью люминометра «Биотокс-10М». Индекс антагонистической активности препарата выражали в виде цифрового показателя, соответствующего проценту снижения интенсивности свечения индикаторного штамма. Признавая несомненную оригинальность этого метода, укажем, что он не имеет преимуществ по простоте или скорости выполнения перед аналогичными методами, основанными на учете ингибирования тех или иных естественных метаболитических активностей индикаторной культуры E. coli, например, ее газообразующей способности. Кроме того, температура совместного инкубирования пробиотика и индикаторной культуры, используемая в данном методе, далека от оптимальной и для кишечной палочки и для лактобактерий. Далее: остается открытым вопрос, не оказало ли влияния включение и функционирование чужеродного гена, ответственного люминисценцию индикаторной культуры, на ее чувствительность/устойчивость к антагонистическому действию испытуемых пробиотических препаратов.



Методы in situ (in vivo). Методы изучения антагонистической активности микроорганизмов in situ являются наиболее трудоёмкими, но и признаются наиболее объективными [19]. Как правило, к этим методам переходят после того, как опытным путем доказана антагонистическая активность того или иного штамма молочнокислых бактерий в условиях in vitro.

Методы in situ могут быть осуществлены путем проведения опытных выработок, например, сыров или кисломолочных продуктов с точным соблюдением всех параметров соответствующего технологического процесса, с использованием в закваске испытуемого штамма-антагониста при заданном исходном уровне заражения тест-микробом и учетом последующей численности этого тест-микроба в полуфабрикатах и готовом продукте; они могут также заключаться в постановке опытных выработок продукта с использованием штамма-антагониста и статистическом учете численности естественной санитарно-показательной микрофлоры этого продукта в сравнении с контрольными выработками.

В свою очередь, методы in vivo предусматривают скармливание подопытным животным, инфицированным тест-микробом, штамма-антагониста с последующим выявлением тест-микроба в кале или прием пробиотических препаратов людьми при различных дисбиотических состояниях с последующим анализом качественных и количественных изменений в микрофлоре кишечника.

Данные методы используют при клинических испытаниях уже готовых пробиотических препаратов, бакконцентратов, заквасок и т.п. Применение этих методов позволяет выявить степень влияния не только штамма-антагониста и тест-штамма друг на друга, но и проследить их взаимодействие как с естественной кишечной микрофлорой, так и с организмом хозяина в целом. Организм животного или человека в данном случае – среда, в которой молочнокислые бактерии будут проявлять антагонистический эффект к тест-штамму, здесь имеет место совокупность, многофакторность, комплексность условий, в которых происходит этот процесс и поэтому, эти результаты наиболее значимы для промышленного и медицинского применения антагонистически активных штаммов молочнокислых бактерий.
Заключение
Сегодня в арсенале исследователя имеется целый ряд методов определения антагонистической активности молочнокислых бактерий. Эти методы, сгруппированные по условиям проведения в методы in vitro и in situ (in vivo), имеют свои преимущества и ограничения. Хотя ни один из них не может быть рекомендован в качестве универсального метода, исследователь, выстраивая стратегию научного поиска, должен выбирать из этого арсенала методы, наиболее соответствующие целям и задачам конкретного исследования и по возможности наиболее приближенные к тем условиям, в которых планируется практически использовать предполагаемый штамм-антагонист.

Литература

1. Гудков А.В. Сыроделие: технологические, биологические и физико-химические аспекты. М.: ДеЛи принт, 2003, 800 с.

2. Гриневич А.Г. Молочнокислые бактерии. Селекция промышленных штаммов. – Мн.: Высш. школа, 1981, 164 с.

3. Инструкция по предупреждению картофельной болезни хлеба. Разработана ГосНИИХП РАСХН. Введена в действие с 15.10.98 г.

4. Иркитова А.Н., Каган Я.Р., Сергеева И.Я. Свойства, экологические аспекты и практическое значение ацидофильной палочки. 3. Антагонистическая активность. Сб.науч.тр. СибНИИС СО РАСХН, в.8, «Актуальные проблемы техники и технологии переработки молока», Барнаул, 2011, С. 216-222.

5. Фирсов Н.Н. Краткий словарь микробиологических терминов. - Екатеринбург: Издательство Уральского университета, 185 с.



  1. Практикум по микробиологии под редакцией А.И. Нетрусова. – М.: «ACADEMA», 2005,603с.

  2. Аникиев В.В., Лукомская К.А. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. – М.: «Просвещение», 1977, 127с.

  3. Глушанова Н.А., Вербицкая Н.Б., Петров Л.Н., Блинов А.И., Шендеров Б.А. Исследование ауто-, изо- и гомоантагонизма пробиотических штаммов лактобацилл. Бюллетень ВСНЦ СО РАМН, 2005. - №6 (44). – С.138-142.

  4. Синюшина М.Н., Самсонова М.Н. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.: «Медицина», 1974, 165с.

  5. Методические указания по селекции мезофильных молочнокислых бактерий в состав бактериальных заквасок и препаратов для мелких сычужных сыров (МУ ВНИИМС 01.86.02.-89), 80с.

  6. Червинец Ю.В., Бондаренко В.М., Шабанова Н.А., Самоукина А.М., Червинец В.М. Бактериоциногенные высокоантагонистичекие штаммы лактобацилл. // Микробиология. – 2006. - №7.-С.78-82.

  7. Глушанова Н.А., Блинов А.И., Бахаев В.В. Об антагонизме пробиотических лактобацилл // Эпидемиология и инфекционные болезни, №6, 2004. – С.37-39.

  8. Глушанова Н.А., Шендеров Б.А. Взаимоотношения пробиотических и индигенных лактобацилл хозяина в условиях совместного культивирования in vitro // Микробиология, 2005, №2, С. 56-61.

  9. Lewus C.B., Montville T.J. Detection of bacteriocins produced by lactic acid bacteria. J. of Microbiol. Meth., 1991, v. 13, N 2, pp. 145-150.

  10. Заборских Е.И. Антагонистическая активность мезофильных молочнокислых стрептококков и их экспериментальная селекция. Диссертация на соискание ученой степени к.б.н., Иркутск, 1976.

  11. Lederber I., Lederber E. Replica plating and indirect selection of bacterial mutante. – J. Bacteriol., 1952, V.63, pp. 318-321.

  12. Банникова Л.А. Селекция молочнокислых бактерий и их применение в молочной промышленности. М: «Пищевая промышленность», 1975, 255с.

  13. Долгих Я.В., Несчисляев В.А., Белова И.В. Сравнительная характеристика поликомпонентных пробиотиков // Вестнику Уральской Медицинской Академической науки. – 2011. - №4/1. – С.97.

  14. Попова-Барзашка С., Коршунов В.М., Тарабрина Н.П., Боссарт Б. Определение антагонистической активности лактобактерий Солко при использовании гнотобиологической технологии // Микробиология. – 1990. - №9. – С.3-6.




Рис.2. Определение антагонистической активности методом перпендикулярных штрихов: 1- зона ингибирования E.coli ; 2 – рост тест- культуры E.coli ; 3- рост штамма антагониста L.acidophilus






Рис.3. Определение антагонистической активности методом блочков: 1- тест-культура; 2 –газон штамма антагониста


УДК 637.1
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МОЛОЧНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ

Иркитова А.Н., Каган Я.Р.

ГНУ Сибирский научно-исследовательский институт сыроделия Россельхозакадемии, Барнаул



Реферат
Существующие методы определения антагонистической активности молочнокислых бактерий можно разделить на две группы: методы in vitro и in situ. В первой, наиболее обширной, группе штамм-антагонист и тест-культура взаимодействуют в искусственных условиях внешней среды, а во второй – непосредственно в тех естественных условиях, в которых предполагается эксплуатировать предполагаемый штамм-антагонист. Частным случаем методов in situ являются методы in vivo, в которых штамм-антагонист взаимодействует с предполагаемой жертвой внутри организма-хозяина в роли которого выступает подопытное животное или человек. В обзоре рассмотрены преимущества и ограничения этих методов.









Травить детей — это жестоко. Но ведь что-нибудь надо же с ними делать! Даниил Хармс
ещё >>