Метод выявления дрожжей и плесневых грибов в пищевых - davaiknam.ru o_O
Метод выявления дрожжей и плесневых грибов в пищевых - davaiknam.ru o_O
страница 1 |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
Похожие работы
|
Метод выявления дрожжей и плесневых грибов в пищевых - страница №1/1
Заместитель Главного государственного санитарного врача Российской Федерации - Главный врач Федерального центра госсанэпиднадзора Минздрава России Е.Н.БЕЛЯЕВ 20 февраля 2004 г. N 24ФЦ/900 Дата введения: 20 февраля 2004 года МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Разработаны: Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России, ОАО "Лианозовский молочный комбинат", фирмой "Лаб-БиоМед". 2. Утверждены и введены в действие Заместителем главного государственного санитарного врача Российской Федерации - Главным врачом Федерального центра госсанэпиднадзора Минздрава России Е.Н. Беляевым.
исследований по выявлению дрожжей и плесневых грибов в определенной навеске пищевых продуктов.
санитарно-эпидемиологическом нормировании, Положением о государственной санитарно- эпидемиологической службе Российской Федерации.
промышленности, осуществляющих производственный контроль пищевых продуктов. 2. Нормативные ссылки 2.1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" N 52-ФЗ от 30 марта 1999 г. 2.2. Закон РФ "О защите прав потребителей" от 7 февраля 1992 г. 2.3. Закон РФ "О качестве и безопасности пищевых продуктов" N 29-ФЗ от 2 января 2000 г. 2.4. "Положение о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации", утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации N 554 от 24 июля 2000 г.
утвержденное Постановлением Правительства Российской Федерации N 554 от 24 июля 2000 г. 2.6. СП 1.2.731-99. Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами. 2.7. ГОСТ 26668-85. Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов. 2.8. ГОСТ 26669-85. Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов. 2.9. ГОСТ 26670-91. Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов. 2.10. ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96). Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований. 2.11. ГОСТ 10444.12-88. Продукты пищевые. Метод определения дрожжей и плесневых грибов. 2.12. ГОСТ 9225-84. Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа. 2.13. ГОСТ 26809-86. Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу. 2.14. ГОСТ 28805-90. Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов. 2.15. ГОСТ 19569-89. Стерилизаторы паровые медицинские. Общие технические требования и методы испытаний. 2.16. ГОСТ 24104-2001. Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия. Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. 2.17. ГОСТ 29227-91. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования. 2.18. ГОСТ 16317-87. Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия.
параметры и размеры.
условия.
3. Требования к помещениям и технике безопасности 3.1. Требования безопасности, общее расположение лаборатории, а также ее инфраструктура должны удовлетворять требованиям СП 1.2.731, ГОСТ Р 51446. 4. Аппаратура, материалы, питательные среды <*> -------------------------------- <*> Производство питательных сред компании Merck KGaA имеет международный сертификат качества ISO 9001:2000. 4.1. Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 30 °С с отклонением от заданной +/- 1 °С 4.2. Автоклав или стерилизатор паровой медицинский ГОСТ 19569 4.3. Облучатель бактерицидный 4.4. Весы лабораторные с наибольшим пределом ГОСТ 24104 взвешивания 200 г и допустимой погрешностью +/- 2 мг 4.5. Шкаф сушильно-стерилизационный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима в диапазоне от 50 до 200 °С с погрешностью Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. +/- 2 °С 4.6. Микроскоп световой биологический с увеличением х 900 - 1000 4.7. Холодильник, позволяющий поддерживать ГОСТ 16317 температуру +2 - 4 °С 4.8. Гомогенизатор бактериологический перистальтического типа Masticator (или аналогичный) со стерильными полиэтиленовыми пакетами 4.9. Пипетки градуированные 1-го и 2-го классов ГОСТ 29227 точности вместимостью 1 куб. см, 10 куб. см 4.10. Пробирки бактериологические вместимостью ГОСТ 25336 10 куб. см 4.11. Чашки бактериологические (Петри) ГОСТ 23932 4.12. Посуда широкогорлая ГОСТ 25336 4.13. Горелка газовая или спиртовая ГОСТ 25336 4.14. Шпатели 15 - 20 см 4.15. Спирт этиловый ректификованный технический ГОСТ 18300 4.16. Метиленовый синий 4.17. Жидкая среда Сабуро 2% глюкозы Merck Cat. N 1.08339.0500 4.18. Селективный агар YGC с хлорамфениколом Merck Cat. N 1.16000.0500 Допускается применение других средств измерения и оборудования с аналогичными характеристиками. 5. Сущность метода Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. Метод основан на высеве определенного количества продукта в жидкую среду для обогащения; инкубировании посевов; последующем пересеве культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективной среды с антибиотиком для выделения и дифференциации дрожжей и плесневых грибов по характеру роста. 6. Методы отбора проб Отбор проб пищевых продуктов, маркировка, сопроводительная документация, транспортировка и хранение в соответствии с ГОСТ 26668, ГОСТ 26809, ГОСТ 92225 и нормативно- технической документацией на анализируемый вид продукта.
автоклаве при температуре (121 +/- 1) °С 15 минут. Жидкая среда прозрачная, слегка желтоватая. рН приготовленной среды: 5,6 +/- 0,2 при 25 °С. Условия хранения Приготовленная среда храниться в холодильнике при температуре (2 - 4) °С. Срок хранения готовой среды - 3 месяца. 7.2.2. Селективный агар YGC с хлорамфениколом (п. 4.18). Состав среды в (г/куб. дм) Дрожжевой экстракт - 5,0; Глюкоза - 20,0; Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. Хлорамфеникол - 0,1; Агар-агар - 14,9. Приготовление среды В 1 куб. дм дистиллированной воды растворить 40 г сухой питательной среды. Стерилизовать в автоклаве при температуре (121 +/- 1) °С 15 минут. Приготовленные чашки со средой прозрачные, слегка желтоватые. рН приготовленной среды: 6,6 +/- 0,2 при 25 °С. Условия хранения Чашки со средой хранить в холодильнике при температуре (2 - 4) °С. Срок хранения готовой среды на чашках - 4 месяца. 7.3. Приготовление раствора метиленового синего (концентрация 10 г/куб. дм). Метиленовый синий в количестве 1,0 г перенести в фарфоровую ступку и растворить в дистиллированной воде. Раствор перенести в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и долить до метки.
месяцев.
7.4.1. Подготовку проб пищевых продуктов проводят в соответствии с ГОСТ 26669, ГОСТ 9225. 8. Порядок проведения испытания 8.1. Для посева навеску продукта, в массе (объеме) которой предусматривается отсутствие дрожжей и плесневых грибов, отобрать весовым или объемным методом, внести в жидкую среду Сабуро, приготовленную по п. 7.2.1, и тщательно перемешать.
специфического запаха, брожения и газа. 8.2. После инкубирования по п. 8.1, посевы в количестве 0,1 куб. см внести на поверхность селективной агаризованной среды, YGC с хлорамфениколом, приготовленной по п. 7.2.2, и равномерно растереть шпателем.
температуре (30 +/- 1) °С в течение (48 +/- 3) часа. 8.3. После инкубирования по п. 8.2.1 провести предварительную оценку результатов. 8.3.1. Наличие видимого роста колоний на селективной агаризованной среде YGC с хлорамфениколом указывает на присутствие дрожжей и плесневых грибов в исследуемом продукте. 8.3.2. Отсутствие роста на агаризованной среде YGC с хлорамфениколом указывает на возможное отсутствие дрожжей и плесневых грибов в исследуемом продукте. 8.4. После инкубирования по п. 8.2.2 провести окончательную оценку результатов. 8.4.1. Отсутствие роста на агаризованной среде YGC с хлорамфениколом указывает на отсутствие дрожжей и плесневых грибов в исследуемом продукте. 8.4.2. Наличие характерных колоний на селективной агаризованной среде YGC с хлорамфениколом указывает на присутствие дрожжей или плесневых грибов в исследуемом продукте.
матовых серовато-белых колоний. Рост плесневых грибов сопровождается появлением плоских или пушистых разрастающихся колоний, часто с окрашенными, плодоносящими или спорообразующими структурами; окраска варьирует.
микроскопическое исследование. Дня этого из отдельных колоний приготовить мазки и окрасить их раствором метиленового синего, приготовленного по п. 7.3, выдержать 5 мин., слить краску, высушить на воздухе и микроскопировать. При микроскопировании дрожжи - одноклеточные микроорганизмы, клетки круглой, овальной или продолговатой формы, часто почкующиеся. Плесневые грибы состоят из нитей-гифов без перегородок; гифы образуют боковые выросты и разветвления.
или плесневых грибов, то выдается заключение о наличии этих микроорганизмов в продуктах. Результаты выявления дрожжей и плесневых грибов в определенной навеске продукта записывают: Дрожжи или/и плесневые грибы выявлены (не выявлены) в Х г (куб. см) продукта, где Х - масса (объем) навески продукта, в которой выявляли дрожжи и плесневые грибы. Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. Приложение N 1 МЕТОД ВЫЯВЛЕНИЯ ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ ---------¬ ¦ Образец ¦ L----T---- \/ ------------------------------------¬ ¦ жидкая среда Сабуро ¦ ¦ соотношение (образец:среда) = (1:4) ¦ L------------------T----------------- \/ ------------------¬ ¦ 48 +/- 3 ч, 30 °С ¦ L---------T-------- 0,1 куб. см\/ ---------------------------------------¬ ¦ Селективный агар YGC с хлорамфениколом ¦ L--------------------T------------------ \/ ------------------¬ ¦ 24 +/- 2 ч, 30 °С ¦ L-------T---------- \/ Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. ---------------------------------¬ ¦ Предварительный учет результатов ¦ L--------------------------------- ---------------------¬ ---------------------¬ ¦ Отсутствие роста ¦ ¦ Наличие роста ¦ ¦ ДРОЖЖИ И ПЛЕСНЕВЫЕ ¦ ¦ ДРОЖЖИ ИЛИ ПЛЕСНЕВЫЕ ¦ ¦ ГРИБЫ ПРЕДВАРИТЕЛЬНО ¦ ¦ ГРИБЫ ¦ ¦ НЕ ВЫЯВЛЕНЫ ¦ ¦ ВЫЯВЛЕНЫ ¦ L---------T----------- L--------T------------ \/ \/ ------------------¬ ------------------¬ ¦ 24 +/- 2 ч, 30 °С ¦ ¦ 24 +/- 2 ч, 30 °С ¦ L-------T---------- L-------T---------- \/ \/ ----------------------------------------¬ -----------------------¬ ¦ Окончательный учет результатов ¦ ¦ Дифференциация дрожжей ¦ L---------------------------------------- ¦ и плесневых грибов ¦ -----------------¬ ----------------¬ L----------------------- ¦ Отсутствие роста ¦ ¦ Наличие роста ¦ ¦ ДРОЖЖИ ИЛИ ¦ ¦ ДРОЖЖИ ИЛИ ¦ ¦ ПЛЕСНЕВЫЕ ГРИБЫ ¦ ¦ ПЛЕСНЕВЫЕ ГРИБЫ ¦ ¦ НЕ ВЫЯВЛЕНЫ ¦ ¦ ВЫЯВЛЕНЫ ¦ L----------------- L---------------- Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд. |