Инсулин-транспортирующие системы крови человека в норме и при сахарном диабете первого типа. Теоретические и прикладные аспекты. 03. - davaiknam.ru o_O
Главная
Поиск по ключевым словам:
Похожие работы
Название работы Кол-во страниц Размер
Лечебное питание при сахарном диабете 1 157.03kb.
Существующие критерии для диагностики сахарного диабета 1 122.96kb.
Л. В. Куликова Межкультурная коммуникация: теоретические и прикладные... 19 2035.49kb.
Актовая речь 4 812.03kb.
Диабетология. Лечение 1 9.27kb.
Первая помощь больному сахарным диабетом 1 52.4kb.
Семинара «Симметрии: теоретические и методические аспекты», Стр. 1 95.24kb.
Занятие по пройденным темам. Патофизиология почек 1 11.6kb.
Департамент развития фармацевтического рынка и рынка медицинской... 1 42.89kb.
Российская сомнология сегодня 1 108.09kb.
Вопросы к экзамену (зачету) по курсу «Психология творчества» 1 102.57kb.
Вопросы для оценки уровня знаний больных сахарным диабетом I типа 1 55.46kb.
Направления изучения представлений о справедливости 1 202.17kb.

Инсулин-транспортирующие системы крови человека в норме и при сахарном диабете первого - страница №1/4



На правах рукописи


ГАРИПОВА МАРГАРИТА ИВАНОВНА

Инсулин-транспортирующие системы крови

человека в норме и при сахарном диабете первого типа.

Теоретические и прикладные аспекты.
03.00.04. – биохимия
АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора биологических наук

Уфа – 2008

Работа выполнена на кафедре биохимии и биотехнологии

ГОУ ВПО Башкирский государственный университет


Научный консультант

доктор биологических наук, профессор




Киреева Наиля Ахняфовна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Лопина Ольга Дмитриевна

Московский государственный университет







доктор биологических наук, профессор

Мединцев Александр Григорьевич

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов РАН







доктор биологических наук, профессор

Мустафина Ольга Евгеньевна

Институт биохимии и генетики УНЦ РАН




Ведущая организация

Казанский государственный университет

Защита состоится «___» __________200__г. в _______ часов

на заседании Объединенного Диссертационного совета ДМ 002.133.01

при Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН.

Адрес: 450054, Уфа, пр. Октября, 71. Институт биохимии и генетики УНЦ РАН,

www.anrb.ru/molgen/dissov.html.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уфимского научного центра РАН.
Автореферат разослан “__ “ ______________ 200_ г.
Ученый секретарь

диссертационного совета – Бикбулатова С. М.



ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. Инсулин – первый белок с доказанной гормональной активностью (Abel, 1926), однако механизм его транспорта в крови во многом остается неясным до настоящего времени. Из данных литературы следует, что в транспорте инсулина принимают участие два механизма. Первый механизм заключается в доставке инсулина к периферическим тканям плазмой крови, в которой инсулин транспортируется в составе двух фракций: “связанного” и “свободного” инсулина (Касаткина, 1996). Состав и свойства белков, формирующих фракцию связанного инсулина, изучены недостаточно; по мнению Н.К. Грачевой и соавторов (1972), эта фракция формируется за счет взаимодействия гормона с трансферином. Однако, ввиду использования авторами физико-химических методов выделения содержащих инсулин фракций, возникает сомнение в том, что были выделены все из них. Что касается свободного инсулина, то до настоящего времени не ясно, находится ли он в истинно свободном состоянии или формирует лабильный комплекс с белками крови (Старосельцева и др., 1983, Марри и др., 1993, Касаткина, 1996, Покровский, 2007).

Второй механизм транспорта инсулина заключается в доставке гормона к периферическим тканям в комплексе со специфическими рецепторами плазматической мембраны эритроцитов (Govin et. al., 1972; Сандуляк, 1972). В работах ряда авторов показано, что эритроциты крови человека и животных участвуют в транспорте инсулина наряду с плазмой и формируют его депо, из которого инсулин поступает в плазму крови и ткани в ответ на повышение уровня глюкозы, молочной кислоты и под влиянием физико-химических факторов (Доломатов, 1999; Картун и др., 2000; Запорожан и др., 2001).

Соотношение между двумя системами транспорта инсулина в норме и при сахарном диабете до настоящего времени не получило своей оценки.

В то же время, несмотря на успехи в изучении этиологии сахарного диабета и создание новых препаративных форм инсулина, сахарный диабет продолжает занимать третье место среди причин смертности после сердечно-сосудистых заболеваний и рака (Старосельцева и др., 1983; Касаткина, 1996; Покровский, 2007; Chan, 2007; Neumiller et. al, 2008). Это свидетельствует о необходимости углубления знаний о механизмах синтеза, транспорта и биологического действия инсулина.

Доказано, что диабет первого типа имеет аутоиммунную природу. Разрушение продуцирующих инсулин b-клеток осуществляют собственные лимфоциты организма (Atkinson, 1990; Bach, 1994; Hom et. al., 1998; Espe et. al., 2007; Stefan et. al., 2007). По данным литературы, аутоиммунная реакция специфична ко многим антигенам -клеток, в том числе к инсулину (Atkinson, 1990). Однако, механизм формирования аутоиммунных реакций к антигенам b-клеток, не выявлен. Известно, что развитие иммунного ответа к антигенным детерминантам зависит от свойств носителя, распознаваемого лимфоцитами (Галактионов, 2004). Роль носителя при антигенном распознавании инсулина могут играть молекулы, транспортирующие его к клеткам-мишеням. Из этого вытекает важность идентификации и изучения свойств компонентов крови, принимающих участие в транспорте инсулина к периферическим тканям в норме и при сахарном диабете.

Цель работы – изучение инсулин-транспортирующих систем крови человека в норме и при сахарном диабете первого типа с использованием аффинных методов.

Задачи исследования:


  1. Оценить соотношение вкладов эритроцитарной и сывороточной систем в транспорт инсулина в сопоставлении с аналогичными соотношениями ряда гидрофильных и гидрофобных гормонов.

  2. Разработать новый носитель для аффинной хроматографии, отличающийся повышенной стабильностью по сравнению с традиционно используемыми полисахаридными носителями.

  3. Изучить свойства полученных на основе нового носителя аффинных сорбентов при использовании в условиях лаборатории, биотехнологического производства и в аффинных диагностических системах.

  4. Создать диагностическую систему для аффинного определения гликозилированной формы гемоглобина в капиллярной крови человека.

  5. Разработать метод количественного определения связывающих инсулин белков сыворотки крови человека и провести сравнение их концентрации в норме и при сахарном диабете первого типа.

  6. Синтезировать аффинный сорбент с иммобилизованным инсулином на основе предложенного носителя и провести аффинное выделение связывающих инсулин белков крови здоровых доноров и больных сахарным диабетом первого типа.

  7. Определить роль ионов цинка и других двухвалентных катионов во взаимодействии инсулина и транспортных белков сыворотки крови.

  8. Оценить гетерогенность инсулинсвязывающих белков крови и провести идентификацию в их составе известных транспортных соединений методами электрофореза, гельхроматографии, иммунохимии и классической биохимии в норме и при сахарном диабете первого типа.

  9. Количественно оценить содержание липидов и гормонов первой и второй групп в составе связывающего инсулин комплекса.

  10. Изучить иммуномодулирующие свойства инсулин-связывающих белков сыворотки крови здоровых доноров и больных сахарным диабетом.

Научная новизна

Впервые установлено, что особенность транспорта инсулина, по сравнению с транспортом других белковых гормонов, заключается в равноценном использовании сывороточного и эритроцитарного механизмов. При сахарном диабете происходит достоверное снижение вклада сывороточной системы в транспорт инсулина, соответственно, возрастает вклад эритроцитарного транспорта.

Разработан и запатентован новый метод синтеза матрицы для аффинной хроматографии, позволяющий получить сорбент с иммобилизованным инсулином, не загрязняющий выделенные связывающие инсулин белки продуктами расщепления полисахаридной матрицы и иммобилизованного лиганда. На основе предложенной матрицы синтезирован и запатентован сорбент с иммобилизованной аминофенилбороновой кислотой, использованный при создании диагностической системы для аффинного определения гликозилированной формы гемоглобина в капиллярной крови человека.

Впервые показано, что в плазме крови человека инсулин взаимодействует со сложным комплексом белков, формирующих при физиологических значениях рН ядро транспортирующего гормоны комплекса. Для включения инсулина в транспортный комплекс необходимо присутствие ионов цинка. Показано, что в крови здоровых доноров в состав связывающего инсулин комплекса входят белки с доказанной транспортной функцией: альбумин, -фетопротеин и трансферин.

Установлено, что при сахарном диабете первого типа состав белков транспортного комплекса достоверно изменяется: альбумин и -фетопротеин, входящие в ядро комплекса в норме, замещаются в нём белком острой фазы воспалительной реакции - 1-кислым гликопротеином.

Доказано, что транспортирующий гормоны комплекс плазмы крови человека является общим для гормонов различной природы: наряду с инсулином, он содержит как гидрофобные (тироксин, трийодтиронин, тестостерон), так и гидрофильные гормоны (лютеинизирующий гормон, тиреотропный гормон, пролактин).

Показано, что гликопротеиды, формирующие комплекс с инсулином в крови здоровых доноров, обладают способностью снижать иммунный ответ при добавлении к антигенам при иммунизации.

Практическая значимость работы

Разработан и запатентован метод получения носителя для аффинной хроматографии на основе поливинилового спирта. Новый носитель (Поливиналь) не уступает по плотности активных групп бромциан-Сефарозе 4В, обладает лучшими, по сравнению с полисахаридными матрицами, колоночными свойствами и превосходит их по химической стабильности (Гарипова М.И. и др. Способ получения носителя для иммобилизации аминосодержащих соединений. Авторское свидетельство № 1789532, 22.09.1992).

Иммуноаффинный сорбент, синтезированный на основе предложенного носителя, испытан в условиях производства человеческого лейкоцитарного интерферона в Отделении интерферона Предприятия по производству бактерийных препаратов НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи на стадии удаления антигенных примесей из полуфабрикатов интерферона. По результатам производственных испытаний, принято Дополнение к регламенту «Лейкинферон для инъекций. Стадия ВР-5.4. Иммобилизация иммуноглобулинов». Сорбент для очистки лейкоцитарного интерферона человека, синтезированный на основе запатентованного носителя, с ноября 1991 года до настоящего времени используется на производстве инъекционного препарата лейкоцитарного интерферона в отделении интерферона Предприятия по производству бактерийных препаратов НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи согласно утвержденному производственному регламенту (Акт об использовании предложения от 23 января 1992 года).

Создана диагностическая система для аффинного определения гликозилированной формы гемоглобина в капиллярной крови человека, включающая микроколонки с иммобилизованной на предложенном носителе мета-аминофенилбороновой кислотой (Гарипова и др. Сшитый поливиниловый спирт с иммобилизованной мета-аминофенилбороновой кислотой в качестве сорбента для аффинного определения гликозилированного гемоглобина. Патент на изобретение № 20935525.2002). Диагностическая система разрешена к применению для диагностики сахарного диабета в лечебно-профилактических учреждениях Республики Башкортостан решением Научно-технического Совета Министерства Здравоохранения Республики Башкортостан от 28 июля 1992 года.



На основе нового носителя получен сорбент с иммобилизованным инсулином и впервые проведено аффинное выделение связывающих инсулин белков сыворотки крови (транспортирующего гормоны комплекса) здоровых доноров и больных сахарным диабетом первого типа. Выделенный аффинно транспортирующий гормоны комплекс крови может быть использован в качестве препарата, корректирующего гормональные нарушения, а также при создании новых препаративных форм инсулина с повышенной эффективностью доставки гормона к периферическим тканям.

Основные положения, выносимые на защиту

  1. Особенность транспорта инсулина к периферическим тканям в сравнении с транспортом большинства других белковых гормонов, заключается в равноценном вкладе в доставку гормона двух транспортных систем крови: системы сывороточных транспортных белков и эритроцитарной системы транспорта.

  2. При сахарном диабете первого типа снижается роль сывороточного и повышается роль эритроцитарного транспорта в доставку инсулина к периферическим тканям.

  3. Предложена новая матрица для аффинной хроматографии, позволяющая получить сорбент с иммобилизованным инсулином, не загрязняющий выделенные инсулин-связывающие белки продуктами расщепления полисахаридной матрицы и иммобилизованного лиганда. На основе новой матрицы синтезирован сорбент с иммобилизованной аминофенилбороновой кислотой, использованный при создании диагностической системы для аффинного определения гликозилированной формы гемоглобина в капиллярной крови человека.

  4. В плазме крови человека инсулин включается в общий для гидрофильных и гидрофобных гормонов транспортный комплекс, ядро которого формируют альбумин, a-фетопротеин, a2-глобулины и b- глобулины (в том числе трансферин), для включения инсулина в транспортный комплекс необходимо присутствие ионов цинка.

  5. При сахарном диабете первого типа состав белков транспортного комплекса изменяется: из него исчезают альбумин и a-фетопротеин, снижается содержание a2 –глобулинов, появляется фракция a1-глобулинов (в том числе кислый a1- гликопротеин).

  6. Белки транспортирующего гормоны комплекса крови в норме обладают иммуносупрессивным действием.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на I Всесоюзной конференции «Аффинная хроматография антител - теоретические и прикладные аспекты» (Москва, 1983), на V Всесоюзной конференции «Новые направления в биотехнологии» (Пущино, 1984), на V Всесоюзном биохимическом съезде (Киев, 1986), на V конференции молодых ученых социалистических стран по биоорганической химии (Пущино,1988), на I съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992), на 33 Международном съезде физиологов (Санкт-Петербург, 1997), на III съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1997), на Всероссийской конференции «Морфологические основы гистогенеза и регенерации тканей» (Санкт-Петербург, 2001), на конференции «Экологические, морфологические особенности и современные методы исследования живых систем» (Казань, 2003), на Всероссийской конференции с международным участием «Достижения биологической функционологии и их место в практике образования» (Самара, 2003), на региональной конференции «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2007), на конференции «Проблемы биоэкологи и пути их решения» (Саранск, 2008).

Публикации. Основные материалы диссертации обобщены в монографии и изложены в 49 печатных работах, в том числе в 10-ти статьях в журналах, рекомендованных ВАК, а также защищены 2 патентами и 2 авторскими свидетельствами.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 336 страницах, содержит 20 рисунков, 24 таблицы и состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитированной литературы, включающего 536 работ.

Благодарности. Выражаю глубокую признательность научному консультанту – профессору, д.б.н. Наиле Ахняфовне Киреевой за плодотворное сотрудничество, консультации и ценные советы, способствовавшие совершенствованию работы; за подробный анализ работы и доброжелательное отношение к.б.н. Ольге Борисовне Кузовлевой и к.м.н. Маю Яковлевичу Корну, за ценные консультации профессору, д.б.н. Станиславу Юрьевичу Веселову, профессору, д.б.н. Сергею Владимировичу Сибиряку и всем моим коллегам, оказавшим неоценимую помощь в работе.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Формирование группы здоровых доноров, из крови которых аффинно выделяли связывающие инсулин белки, проводили на основании заключения эндокринолога об отсутствии отклонений от нормы в регуляции углеводного обмена. В качестве второго критерия отбора использовано процентное содержание гликозилированного гемоглобина (% Ггб) в капиллярной крови обследуемых, отражающее средний уровень гликемии за 2 месяца, предшествующие взятию пробы (Brownlee et.al., 1980; Garlick et. al., 1983; Hubbuch, 1983). Для количественного определения белков, связывающих инсулин, в плазме крови и их аффинного выделения были отобраны пробы крови 800 здоровых добровольцев 20-25 лет с содержанием Ггб от 4 до 7,5%, что соответствует нормальному уровню гликемии.

Определение коэффициентов распределения гормонов проведено в пробах крови 100 здоровых доноров 25-35 лет со средним содержанием гликогемоглобина в капиллярной крови 5,2±0,41%.

Для количественного определения белков, связывающих инсулин, в плазме крови и их аффинного выделения были отобраны пробы крови 800 больных сахарным диабетом первого типа (8 серий по 100 пациентов), находившихся на стационарном лечении в эндокринологических отделениях больниц г. Уфы. Процентное содержание гликозилированной формы гемоглобина в капиллярной крови обследованных колебалось от 10,3 % до 18,6 %, что соответствует стадии заболевания с неудовлетворительной компенсацией нарушений углеводного обмена. Эта стадия заболевания была выбрана в связи с тем, что именно в стадии декомпенсации следовало ожидать проявления наиболее выраженных изменений транспорта инсулина.



В работе использованы следующие методы. Аффинное выделение связывающих инсулин белков крови проводили на сорбентах, синтезированных на основе предложенного носителя. Иммуноферментное определение альбумина крови человека, -фетопротеина, овальбумина, и антител к овальбумину проводили по стандартному методу (Engval et. al., 1971) с использованием наборов для иммуноферментного анализа производства Предприятия по производству бактерийных препаратов НИИ им. Н.Ф. Гамалеи. Иммуноферментное определение гормонов, альбумина и -фетопротеина проводили с использованием диагностических наборов фирмы НВО Иммунотех (Россия). Иммунолюминесцентное определение гормонов на автоматическом анализаторе Amerham (Англия), проводили при помощи наборов Amerlite. Иммунонефелометрическое определение 1-кислого гликопротеина и трансферина проведено при помощи диагностических наборов фирмы НВО Иммунотех (Россия). Электрофорез белков на ацетатцеллюлозных пленках проводился c использованием системы Microtech 648 PC фирмы Interlab, предназначенной для полностью автоматизированного проведения электрофореза. Иммуномодулирующие свойства инсулин-связывающих белков крови здоровых доноров и больных сахарным диабетом изучены в эксперименте по иммунизации белых лабораторных мышей дифтерийным анатоксином. Для определения концентрации противодифтерийных антител и связывающих инсулин белков крови использовали реакцию пассивной гемагглютинации с диагностикумом, приготовленным по ранее описанному методу (Гарипова и др., 2005). Изоэлектрическое фокусирование связывающих инсулин фракций крови здоровых доноров и больных сахарным диабетом проводили по ранее описанному методу (Гарипова и др., 1984) с использованием амфолинов фирмы Pharmacia (Швеция). Спектры поглощения выделенных фракций в ультрафиолетовой области получены при помощи Спектрофотометра СФ-123 (Россия). Расчет статистических ошибок, применение критериев сравнения и корреляционный анализ проводили с использованием статистического пакета Statistica for Windows версии 5,5
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Соотношение вкладов эритроцитарной и сывороточной систем в транспорт инсулина и ряда гормонов первой и второй групп. Проведено экспериментальное определение коэффициентов распределения между поверхностью эритроцитов и плазмой крови здоровых доноров инсулина и ряда гормонов первой и второй групп. Величина коэффициента распределения определялась двумя методами. В крови здоровых доноров коэффициент распределения рассчитывался как отношение концентрации гормона, элюированного с поверхности эритроцитов к его концентрации в плазме крови. Определение концентрации гормона проводили иммунолюминесцентным методом. Коэффициент распределения инсулина в крови больных сахарным диабетом и здоровых доноров определяли по соотношению активности пероксидазы, конъюгированной с инсулином, связанной с поверхностью эритроцитов, к её активности в плазме крови (*). Коэффициент распределения инсулина в крови здоровых доноров определен при использовании каждого из указанных методов. Сопоставление значений коэффициента распределения инсулина в норме, полученных двумя методами, показало, что использованные методы дают статистически тождественные результаты (0,49±0,0132 и 0,47±0.0159*, табл. 1). Обследовано 100 здоровых доноров 20-35 лет.

Из данных таблицы 1, следует, что для всех исследованных гормонов второй группы (как простых белков, так и гликопротеидов), характерно резкое преобладание связанной с эритроцитами фракции гормона по сравнению с гормоном, присутствующим в плазме крови. Величина определенных в эксперименте коэффициентов распределения гормонов второй группы, за исключением инсулина, превышает 100. Очевидно, это свидетельствует, о наличии на поверхности эритроцитов специфических рецепторов к этим гормонам и о чрезвычайно низкой концентрации в плазме крови связывающих эти гормоны белков.

Установлено, что коэффициенты распределения гормонов первой группы (прогестерона, кортизола, трийодтиронина, тироксина) близки к 0 (таблица 1). Следовательно, гидрофобные гормоны транспортируются в основном плазмой крови, что согласуется с данными литературы о присутствии в плазме транспортирующих эти гормоны гликопротеидов (Godovac-Zimmermann ; 1988; Марри,1993; Kengni et.al., 2007).

Из данных, приведенных в таблице 1, следует, что в норме коэффициент распределения инсулина составляет 0,49±0,0053. Очевидно, это свидетельствует о том, что в отличие от других гормонов второй группы, инсулин доставляется к периферическим тканям при равноценном участии двух механизмов, характерных как для гормонов второй, так и первой групп.



Таблица 1

Распределение гормонов между поверхностью эритроцитов и плазмой крови здоровых доноров


Гормон

группа

Поверхность эритроцитов



Плазма



Коэффициент распределения эритроциты/

плазма


Кортизол

I

0

148,5±3,52 нмоль/л

0

Прогестерон

I

0

0,88 ±0,041 нмоль/л

0

Т3

I

0

1,1± 0,05

нмоль/л


0

Т4

I

0

57,9 ± 2,64 нмоль/л

0

Тиреотропный гормон

II


65,7± 2,98

мкМЕ/мл


0,55± 0,027

мкМЕ/мл


119,4545±3,56

Лютеинизирующий гормон

II


200± 8,36 МЕ/мл

0,49 ± 0,025

МЕ/мл


408,1633±8,64

Фолликулостимулирующий гормон

II


360 ± 17,55

МЕ/мл


3,56 ± 0,182

МЕ/мл


101,12±17,56


Пролактин

II

132,4 ± 6,74

нг/мл


1,3 нг/мл

101,8

Инсулин

норма



II

33,03±1,66%

66,97±1,56%

0,49±0,0132

31,80±1,25%*

66,97±1,56%*

0,47±0.0159*

Инсулин

сахарный диабет



II

41,96±1,84% *


58,04 ±1,42%*



0,73±0,0165*

Таким образом, согласно полученным данным, своеобразие транспорта инсулина, в сравнении с транспортом других белковых гормонов, заключается в том, что в него вносит значительный вклад система транспорта, типичная для гидрофобных гормонов - система транспортных белков плазмы крови.

Для выявления изменений в транспорте инсулина, происходящих при сахарном диабете, обследована группа 100 больных сахарным диабетом первого типа с неудовлетворительной компенсацией заболевания (процентное содержание фракции гликозилированного гемоглобина в капиллярной крови обследованных в среднем составило 9,36±0,52%). Среднее значение коэффициента распределения инсулина между эритроном и плазмой в пробах крови больных диабетом составило 0,73±0,0065, то есть было достоверно выше аналогичного показателя, определенного в пробах крови здоровых доноров (таблица 1, t=2,176, p=0,036). На основании результатов сравнения коэффициентов распределения инсулина в норме и при сахарном диабете первого типа, был сделан вывод о том, что при диабете наблюдается достоверное увеличение вклада эритроцитарной системы в доставку инсулина к периферическим тканям. Увеличение эритроцитарного транспорта инсулина при сахарном диабете, вероятно, носит компенсаторный характер и обусловлено снижением его взаимодействия с транспортными белками крови. Эти данные согласуются с полученными ранее результатами титрования активности связывающих инсулин сывороточных белков в крови здоровых доноров и больных сахарным диабетом, из которых следует, что связывание инсулина белками плазмы крови снижается при сахарном диабете первого типа (Гарипова и др., 2005).

Снижение роли сывороточного транспорта инсулина при сахарном диабете первого типа свидетельствует о необходимости изучения состава и свойств инсулин-транспортирующих белков. Наиболее полное выделение всего спектра взаимодействующих с инсулином белков крови возможно при использовании аффинной хроматографии. В предварительных экспериментах установлено, что аффинные сорбенты с инсулином, иммобилизованным на основе активированной бромцианом Сефарозы-4В, не позволяют выделить связывающие инсулин белки крови, свободные от примесей продуктов разложения полисахаридной матрицы. В связи с этим, на первом этапе исследований была поставлена задача разработать носитель для аффинной хроматографии, отличающийся повышенной стабильностью по сравнению с традиционно используемыми полисахаридными носителями.



следующая страница >>



Враг занимает больше места в наших мыслях, чем друг — в нашем сердце. Альфред Бужар
ещё >>